病毒滴度是什么？如何進行病毒滴度的測定？

病毒滴度即病毒的毒力，或毒價，衡量病毒滴度的單位有最小致死量（MLD）、最小感染量（MID）和半數(shù)致死量（LD50），其中以LD50 最常用。它是指在一定時間內(nèi)能使半數(shù)試驗動物致死的病毒量。

前面我們介紹過慢病毒包裝，這里重點介紹一下病毒滴度，那么什么是慢病毒滴度？慢病毒滴度是用于評估轉(zhuǎn)導(dǎo)一定數(shù)量靶細胞所需要的病毒數(shù)量，即每升溶液中含有的病毒數(shù)量。轉(zhuǎn)導(dǎo)單位(TU)即能夠感染并整合到細胞內(nèi)的病毒載體基因組。

病毒包裝后的效力如何，如何定量，也是必須要檢測的，專業(yè)術(shù)語稱為：病毒滴度的測定。下面我們就來聊下幾種常見的慢病毒載體滴度的檢測方法。

一、病毒滴度檢測ELISA法

p24蛋白是慢病毒外殼中含量zui大的標志性蛋白。p24 ELISA法測量病毒上清液中p24衣殼蛋白的量，然后將p24的含量水平與病毒滴度關(guān)聯(lián)起來。Cell Biolabs提供的基于慢病毒p24蛋白的ELISA分析分兩種，一種稱為傳統(tǒng)的p24蛋白ELISA檢測（Quantitation Kit (Traditional HIV p24 ELISA)），能檢測所有p24蛋白，從而實現(xiàn)對病毒滴度的定量，可檢測1 ng/mL HIV p24蛋白，zui后分光光度計讀取數(shù)據(jù)。

但是由于這種傳統(tǒng)的p24 ELISA 法能檢測所有p24蛋白，所以病毒滴度會偏高。同時Cell Biolabs的新Lentivirus Titer Kit(Lentivirus-Associated HIV p24)能分離出包裝細胞產(chǎn)生的游離p24蛋白，只檢測病毒顆粒表面的p24，因此實驗數(shù)據(jù)更真實準確，可檢測1 ng /mL HIV p24蛋白，zui后分光光度計讀取數(shù)據(jù)。

1、傳統(tǒng)的p24 ELISA法

QuickTiter 慢病毒滴度檢測試劑盒（p24蛋白ELISA檢測）：慢病毒載體的HIV-1 p24核心蛋白的定量是一種確定慢病毒物理滴度的有效且廣為人知的方法。QuickTiter慢病毒定量試劑盒提供了一種方便的p24抗原定量方法。

2、新的p24 ELISA法

QuickTiter 慢病毒滴度檢測試劑盒（慢病毒相關(guān)p24蛋白ELISA檢測）：可zui大程度地減少此問題。一項專有技術(shù)可在運行測定的ELISA部分之前，將慢病毒與溶液中的游離p24分離。

二、病毒滴度檢測Real-time PCR法

利用基于SYBRGreen的熒光定量PCR方法，PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應(yīng)中每一個循環(huán)擴增產(chǎn)物量的變化，通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析，根據(jù)相應(yīng)公式計算慢病毒滴度。

Lenti-Pac?慢病毒滴度檢測試劑盒（LT005）系列為簡便、快速檢測慢病毒顆粒的滴度而設(shè)計。試劑盒包含從RNA抽提到qRT- PCR檢測過程的全套試劑，樣品經(jīng)過RNA抽提、DNase消化、反轉(zhuǎn)錄、qRT-PCR步驟即可確定慢病毒滴度。

特色：

能夠判斷慢病毒是否包裝成功；

準確測定病毒拷貝數(shù)，以確保細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達的效率；

提供滴度檢測過程從病毒的RNA提取到qPCR檢測所需要的試劑。

文章來源：艾美捷科技

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