WB二抗怎么選擇

二抗分為完整抗體形式和抗體片段形式。使用完整抗體還是抗體片段通常取決于所進行的應用。例如，抗體片段對于免疫組織化學和免疫熒光是最佳選擇，因為它們的分子量較小并易于穿透組織。在其它大多數(shù)應用中，完整抗體是最常用的二抗類型。

完整的抗體包括重鏈和輕鏈，通過可變區(qū)提供二價結合能力，同時具有可偶聯(lián)產生信號的染料或酶標記物的的恒定區(qū)。但是，完整抗體可能會導致高背景和低特異性，因為所有免疫球蛋白的輕鏈區(qū)是相同的，從而增加了交叉反應性。

F(ab’)2片段是通過對完整抗體使用胃蛋白酶進行酶解后獲得的。這種抗體片段包含帶有兩個抗原結合位點的可變區(qū)，但缺少抗體的Fc片段。因此，F(xiàn)(ab’)2片段對于可能含有Fc受體的樣本而言是應當優(yōu)先選擇的二抗類型。同時它們比完整抗體要小，因此穿透某些樣本的效果更好。但是，分子較小也意味著可以同F(xiàn)(ab’)2片段偶聯(lián)的染料和酶也更少，從而使得這類二抗的靈敏度不及完整抗體形式的二抗。Fab’片段是通過對完整抗體使用木瓜蛋白酶進行酶解后獲得的。這類抗體片段包含一個單獨的結合結構域，同時帶有一小部分恒定區(qū)。Fab’片段可以用于不適合使用二價抗體的一些特定應用。

圖3. 抗體片段的名稱和結構。

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