HLA血清學(xué)定型試驗(yàn)總結(jié)

HLA血清學(xué)定型試是臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技士/技師/主管技師考試復(fù)習(xí)需要了解的檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)，醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理了相關(guān)內(nèi)容與考生分享，希望給予大家?guī)椭?/p>

HLA-A、B、C、DR或DQ位點(diǎn)的抗原可用血清方法進(jìn)行檢測(cè)，所以稱為SD抗原（serologicallydefinedantigen），其檢測(cè)方法目前普遍采用補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒（complementdependentcytotoxicyty，CDC）試驗(yàn)。

1.試驗(yàn)方法美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院（NIH）的標(biāo)準(zhǔn)方法如下：將一系列已知特異性的標(biāo)準(zhǔn)分型血清（1μl/孔）按設(shè)計(jì)好的方案加到72孔或60孔專用反應(yīng)板中（如暫時(shí)不用可以冰凍保存）；加入待檢淋巴細(xì)胞2000個(gè)/1μl/孔，置室溫30min讓抗體與抗原結(jié)合；加入補(bǔ)體（多為家兔混合血清）5μl，置室溫60min；每孔加入5%伊紅2～3μl，使死細(xì)胞著色；3～5min后每孔加12%福爾馬林8μl固定細(xì)胞；待細(xì)胞全部沉淀后用相差顯微鏡或倒置顯微鏡觀察結(jié)果。某孔的著色細(xì)胞超過(guò)50個(gè)即為陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明被檢細(xì)胞的HLA型與該孔所加抗體的相一致；否則為不一致。

2.細(xì)胞分離檢測(cè)活體可取外周血直接分離；檢測(cè)尸體時(shí)取淋巴結(jié)，制成單個(gè)細(xì)胞并洗滌后再分離。檢測(cè)HLAⅠ類(lèi)抗原時(shí)取單個(gè)核細(xì)胞層的細(xì)胞即可應(yīng)用，因?yàn)樵搶蛹?xì)胞都表達(dá)Ⅰ類(lèi)抗原；但檢測(cè)HLA-DR和DQ等Ⅱ類(lèi)抗原時(shí)，就需要進(jìn)一步分離較純的B細(xì)胞（純度達(dá)80%以上），因?yàn)棰蝾?lèi)抗原不分布在T細(xì)胞上。

3.分型血清試驗(yàn)用的標(biāo)準(zhǔn)抗血清必須從經(jīng)產(chǎn)婦（尤其多產(chǎn)婦）的血清中篩選，胎盤(pán)液或其他體液也可應(yīng)用；也可通過(guò)人工免疫獻(xiàn)血員的方法得到。篩選的方法也用CDC試驗(yàn)，只是將已知與待檢互換醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。Ⅱ類(lèi)抗血清篩選后還必須用混合血小板將其中可能含有的Ⅰ類(lèi)抗體吸收去，因試驗(yàn)用的B細(xì)胞上也有Ⅰ類(lèi)抗原。許多人嘗試過(guò)抗HLA的單克隆抗體，但是多不成功，因鼠源性抗體主要是針對(duì)人類(lèi)的公共抗原而非某個(gè)體的HLA私有抗原；還有一個(gè)原因是鼠源性抗體多不能固定補(bǔ)體，不能用細(xì)胞毒方法進(jìn)行檢測(cè)。

4.HLA定型板某些專門(mén)實(shí)驗(yàn)室將HLA定型血清預(yù)先加到專用的反應(yīng)板上冰凍保存，可供自己或出售給他人使用，試驗(yàn)時(shí)只須加入待檢細(xì)胞及其它試劑即可。定型板中抗血清的種類(lèi)要覆蓋本民族或本地區(qū)80%以上的抗原，其中高頻抗原每種抗血清3份以上，低頻抗原每種抗血清2份以上。定型血清板須經(jīng)幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可或有關(guān)部門(mén)核準(zhǔn)后才能銷(xiāo)售和使用；現(xiàn)在國(guó)內(nèi)所做的定型板多限于HLAⅠ類(lèi)抗原的檢測(cè)。