遺傳病科普之先天性耳聾

日期：2016/11/17 12:40:13 發(fā)布人：中科基因

疾病簡介

新生兒耳聾的發(fā)病率為：1/500～1/1000，據(jù)中國衛(wèi)生部2003年在第五屆聽力國際科學(xué)大會上的報(bào)告，我國有聽力語言障礙殘疾人約2057萬，占全國人口的16.79‰，每年新增耳聾患兒約3萬余名。

導(dǎo)致耳聾的原因有：遺傳、藥物、感染、疾病、環(huán)境噪聲污染及意外事故等，其中遺傳因素導(dǎo)致的聽力喪失占了50%以上。

遺傳性聽力喪失根據(jù)是否伴有耳外組織的異常或病變可將其分為綜合征性聽力喪失（syndromic hearing loss，SHL）和非綜合征性聽力喪失（nonsyndromic hearing loss，NSHL），其中NSHL占70%以上。NSHL根據(jù)遺傳方式可分為：常染色體隱性遺傳性耳聾、常染色體顯性遺傳性耳聾、X連鎖遺傳性耳聾、Y連鎖遺傳性耳聾和線粒體遺傳性耳聾，其中75～80%為常染色體隱性遺傳，10～20%為常染色體顯性遺傳，X連鎖和線粒體遺傳不到2%。

國家衛(wèi)生部于1999年發(fā)布了耳毒性藥物臨床應(yīng)用指導(dǎo)原則（附件一），規(guī)定禁用和慎用藥物30多種，以減少耳聾的發(fā)生；將新生兒聽力篩查列入新生兒疾病篩查項(xiàng)目，以做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療和早干預(yù)。

對于有殘余聽力的耳聾患兒，根據(jù)聽力損失的不同，驗(yàn)配適合的助聽器進(jìn)行聽力補(bǔ)償；對于極重度和全聾的患兒，將植入人工耳蝸進(jìn)行聽力重建。兩者都需進(jìn)行聽力語言康復(fù)訓(xùn)練。

迄今為止，158個非綜合癥性耳聾位點(diǎn)已定位，包括57個常染色體顯性位點(diǎn)、77個常染色體陰性位點(diǎn)、7個X-染色體連鎖位點(diǎn)、2個修飾位點(diǎn)、1個Y-染色體位點(diǎn)和14個線粒體位點(diǎn)。通過位置克隆的方法已確定53個致病基因，包括27個常染色體隱性基因、21個常染色體顯性基因、1個X-染色體連鎖基因和4個線粒體基因。在這些基因中，GJB2，SLC26A4和線粒體12S rRNA基因的研究比較深入，不同種族和不同的人群存在不同的突變形式和突變頻率，是我國最主要的致聾基因，因些針對以上三種基因的全外顯子進(jìn)行檢測具有非常重要的診斷價值。

先天性耳聾主要臨床表現(xiàn)為：先天性耳聾表現(xiàn)為出生時或出生后不久，就已存在的聽力障礙，可伴或不伴其它系統(tǒng)的疾病。

一、病因分類

1．遺傳性耳聾：由位于性染色體上的致聾基因引起的耳聾，稱為伴性遺傳性聾。可以表現(xiàn)為無相關(guān)畸形的各種骨迷路和（或）膜迷路發(fā)育異常，和伴有心臟、腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)、頜面及骨骼系統(tǒng)、代謝內(nèi)分泌系統(tǒng)、皮膚和視器等組織器官畸形的眾多綜合征。

2．非遺傳性耳聾：妊娠早期母親患風(fēng)疹、腮腺炎、流感等病毒感染性疾患，或梅毒、糖尿病、腎炎、敗血癥、克汀病等全身疾病，或大量應(yīng)用耳毒性藥物均可使胎兒耳聾。母子血液Rh因子相忌，分娩時產(chǎn)程過長、難產(chǎn)、產(chǎn)傷致胎兒缺氧窒息也可致聾。

二、常見聾病基因致聾特點(diǎn)

1．GJB2基因致聾特點(diǎn)

GJB2基因突變所致的遺傳性非綜合征型耳聾在兩側(cè)對稱性、始發(fā)年齡、聽力損失程度、穩(wěn)定性方面都具有多態(tài)性。GJB2 相關(guān)性耳聾一般為雙耳同時受累，耳聾程度呈對稱性，少數(shù)表現(xiàn)為不對稱性，也有單耳受損報(bào)道;始發(fā)年齡不同，多數(shù)表現(xiàn)為出生即有的先天性耳聾，部分表現(xiàn)為嬰幼兒期或青少年始發(fā)的后天性耳聾，但多為語前聾;其聽力損失程度變異比較大，可由輕度到極重度，但多數(shù)為重度或極重度耳聾。主要的聽力圖曲線為殘余型、斜坡型和平坦型。極少為U型。但沒有以低頻聽力損失為主的上升型曲線。研究提示GJB2對耳蝸的損傷主要是在外毛細(xì)胞，這一結(jié)論與動物學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相一致。同時有表明，并非所有的GJB2基因突變患者在出生時即已發(fā)生聽力方面的病理損傷或者是表現(xiàn)出聽力損傷的癥狀，在連接蛋白功能缺陷最終形成并對機(jī)體造成損害前，可能存在一個早期的功能窗口期。患者的聽力學(xué)表現(xiàn)與發(fā)生在GJB2基因上的突變位點(diǎn)有很大的關(guān)系，截短突變（純合子）較一種截短突變合并一種非截短突變的復(fù)合雜合突變將會導(dǎo)致更為嚴(yán)重的表型。

2．SLC26A4基因致聾特點(diǎn)

SLC26A4基因突變引起患兒前庭導(dǎo)水管擴(kuò)張，是一種先天性內(nèi)耳畸形疾病，約占我國耳聾患者的14%左右，此類患者在出生時聽力損失可能并不存在或尚未明顯表現(xiàn)，臨床表現(xiàn)為波動性和進(jìn)行性感音神經(jīng)性聽力損失，可伴有前庭癥狀，發(fā)病年齡為從出生后至青春期任何年齡段，但多數(shù)為出生后幾年內(nèi)發(fā)病，可表現(xiàn)為學(xué)語后聽力損失。聽力損失多數(shù)是在很長的一段時間內(nèi)以漸進(jìn)性的方式出現(xiàn)，程度可表現(xiàn)為從接近正常到極重度聾，雙耳聽力可不對稱，聽力下降的程度與前庭水管的外口大小似無相關(guān)性。發(fā)病突然或隱匿，之前有感冒、輕微顱外傷或氣壓性創(chuàng)傷或其他使顱內(nèi)壓增高的病史。目前對于此類疾病的診斷主要是依靠聽力學(xué)檢查結(jié)合影象學(xué)檢查結(jié)果來進(jìn)行的。

3．12s RNA A1555G基因致聾特點(diǎn)

mtDNA A1555G是1993年P(guān)resant等人發(fā)現(xiàn)的，最常見于非綜合性耳聾患者的mtDNA 12Sr RNA基因上的1555位點(diǎn)發(fā)生A>G的同質(zhì)性突變，并且只通過母親傳遞這種變異。此類耳聾的共同特征是雙側(cè)、對稱性的、以高頻聽力下降為主的感音神經(jīng)性耳聾。但在不同的患者之間，這種耳聾臨床表現(xiàn)有多樣性，攜帶有該突變的個體可表現(xiàn)為極重度的先天性耳聾，也可表現(xiàn)為成年后才出現(xiàn)的進(jìn)行性的中度聽力損失，有攜帶者在用相關(guān)藥物一年后聽力仍然正常，也有一些mtDNA A1555G突變的攜帶者在沒有使用氨基糖苷類抗生素的情況下也表現(xiàn)為聽力障礙;2009年程祖建等報(bào)道了mtDNA A1555G突變異質(zhì)性與臨床表型有密切關(guān)系，認(rèn)為個體攜帶突變型比例與耳聾程度正相關(guān)。

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產(chǎn)前診斷策略和方法

產(chǎn)前診斷是在對先證者和父母進(jìn)行分析、確定其突變后，通過胎兒材料（絨毛、羊水）的DNA分析，有針對性地檢測胎兒是否存在與先證者相同的基因突變。因此在對先天性高危家系進(jìn)行產(chǎn)前診斷之前，必須明確先證者是何種基因的致病突變。

一、GJB2基因檢測

1.GJB2基因突變特點(diǎn)

GJB2基因編碼縫隙連接蛋白26(connexin 26,CX26)，于1993年被克隆出來的，1997年首次被發(fā)現(xiàn)其與NSHI有密切關(guān)系，定位于常染色體13q11-12，DNA全長為4804bp，編碼區(qū)為678bp.已發(fā)現(xiàn)GJB2基因有至少109種突變方式，出現(xiàn)在編碼區(qū)的突變有至少106種，我國人群中常見的突變有235delC，299-300delAT，79G>A，341A>G，109G>A等，其中235delC和109G>A是中國最主要的致聾突變方式。

2.GJB2 基因檢測策略和方法

直接測序法：對于高度懷疑遺傳性耳聾的患兒可對GJB2外顯子PCR擴(kuò)增后直接測序。

預(yù)篩后進(jìn)行基因測序法：對大量樣本進(jìn)行檢測時，可先通過HRM（高分辨率熔解曲線分析）或HPLC（高效液相色譜分析）等方法對野生型樣本進(jìn)行初篩后，再對可疑樣本進(jìn)行基因型確診。

二、SLC26A4基因檢測

1.SLC26A4基因突變特點(diǎn)

SLC26A4基因，又叫PDS基因，是1997年由Everett等最早發(fā)現(xiàn)的，定位于7q31，它包含21個外顯子，開放閱讀框?yàn)?343bp，負(fù)責(zé)編碼由780個氨基酸的蛋白質(zhì)Pendrin。Pendrin主要由疏水性氨基酸組成，屬于離子轉(zhuǎn)運(yùn)體家族，研究表明其功能主要與碘/氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)，PDS基因突變可導(dǎo)致Pendrin陰離子的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)活動障礙，使氯離子運(yùn)輸障礙進(jìn)而造成內(nèi)耳淋巴液成分異常，從而損害神經(jīng)上皮并使膜迷路擴(kuò)大，導(dǎo)致前庭水管擴(kuò)大及內(nèi)耳畸形進(jìn)而出現(xiàn)EVAS.該基因的突變形式存在多樣性，目前已報(bào)道的突變形式就多達(dá)203種，存在明顯的種族差異性，進(jìn)年來許多學(xué)者在中國開展了大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)：在中國人群中以IVS7-2A>G最為多見，約75%的前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大的患者可以發(fā)現(xiàn)此種突變，另外加上2168A>G，1229C>T，2027T>A則可以對我國90-95%以上EVAS患者做出明確的病因?qū)W診斷，因些對該基因檢測可分為重點(diǎn)突變熱點(diǎn)檢測和全外顯子檢測兩種。

2.SLC26A4 基因檢測策略和方法

直接測序法：對于高度懷疑SLC26A4遺傳性耳聾的患兒（聽力進(jìn)行性下降或CT顯示有前庭導(dǎo)水管擴(kuò)張的）可對SLC26A4的21個外顯子全部進(jìn)行PCR擴(kuò)增后直接測序。

預(yù)篩后進(jìn)行基因測序法：對大量樣本進(jìn)行檢測時，可先通過HRM（高分辨率熔解曲線分析）或HPLC（高效液相色譜分析）等方法對野生型樣本進(jìn)行初篩后，再對可疑樣本進(jìn)行基因型確診。

重點(diǎn)突變熱點(diǎn)的檢測：對于中國多見的IVS7-2A>G 2168A>G，1229C>T，2027T>A的突變位點(diǎn)，可采用相應(yīng)外顯子測序，TaqMan探針，限制性內(nèi)切酶等方法進(jìn)行檢測

三、12s RNA A1555G基因檢測

1.12s RNA A1555G基因突變特點(diǎn)

12s RNA A1555G是位于線粒體基因上的一個點(diǎn)突變，目前已知其與氨基糖苷類藥物致聾密切相關(guān)，對其檢測可采用針對點(diǎn)突變的各種檢測方法來進(jìn)行

2.12s RNA A1555G基因檢測策略和方法

可采用DNA測序法、酶切法、Taqman探針法，LCR（鏈接酶連反應(yīng)）等

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遺傳咨詢

遺傳咨詢是一個與患者或者有風(fēng)險個體的交流過程，其目的是幫助他們了解所患疾病的診斷、性質(zhì)、發(fā)生和傳遞的可能性、可供選擇的治療或預(yù)防的措施，供患者及其家屬在決定婚姻、生育等問題時參考。

GJB2與SLC26A4基因引起先天性耳聾的遺傳方式為常染色體隱性遺傳，對于無家族史的先證者來說，其父母則為聾病基因攜帶者，即攜帶有一個耳聾致病突變位點(diǎn)的雜合子，攜帶者無聽力障礙臨床癥狀。先證者的同胞有1/4的風(fēng)險患病，1/2的風(fēng)險成為耳聾致病突變攜帶者，并有1/4的可能性為不帶有耳聾致病突變的正常人；對于有家族史的先證者來說，則其同胞患病和攜帶致病突變的風(fēng)險則更高；先證者的后代肯定為攜帶者。先證者父母的同胞為攜帶者的可能性為1/2。如先天性耳聾家庭要再次生育，改須要有基因檢測的保證，需進(jìn)行產(chǎn)前基因診斷。

12s RNA A1555G引起先天性耳聾的遺傳方式為母系遺傳方式，女性攜帶者可100%傳給后代，其母系親屬攜帶有同樣突變的機(jī)率為100%，男性攜帶者的母系親屬攜帶有同樣突變的機(jī)率為100%，但其后代則不會被遺傳，該基因突變攜帶者可通過禁用耳聾性藥物來避免聽力損傷的發(fā)生，具有明顯的預(yù)防意義。

如果產(chǎn)前診斷胎兒為致聾基因攜帶者，應(yīng)告知疾病危害性，處理應(yīng)由患者家庭自主決定。

1.抽取羊水時如果有母親血液的污染，必需在羊水細(xì)胞培養(yǎng)后抽取DNA。抽取外周血時注意標(biāo)本不能搞錯，不能污染。

2.使用的PCR擴(kuò)增儀，水平電泳儀，紫外分析儀，37度水浴箱按照制造商規(guī)定的程序和頻率進(jìn)行維護(hù)，并對所進(jìn)行的維護(hù)進(jìn)行記錄，寫成文件。

3.使用的試劑記錄并確認(rèn)配制或購買的時間，保存條件，使用期限，使用人等。

4.實(shí)驗(yàn)記錄和作規(guī)范準(zhǔn)確記錄實(shí)驗(yàn)時間，條件，情況和結(jié)果。遵守分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)必需的準(zhǔn)則。特別注意PCR產(chǎn)物的污染問題。

5.室內(nèi)質(zhì)量控制家系分析的同時，設(shè)立以往診斷明確的患者的陽性對照，正常人的陰性對照，每個實(shí)驗(yàn)結(jié)果至少重復(fù)2次，2次結(jié)果必需相符，否則重新采集樣本及實(shí)驗(yàn)。

6.結(jié)果的報(bào)告和保存應(yīng)由2名經(jīng)認(rèn)證審批的專業(yè)技術(shù)人員簽發(fā)，審核人必須具有副高以上專業(yè)技術(shù)職稱。DNA樣本和病例檔案要長期保存。

7.出生后驗(yàn)證對流產(chǎn)胎兒應(yīng)盡量進(jìn)行驗(yàn)證，重復(fù)診斷實(shí)驗(yàn)。新生兒出生后需隨訪驗(yàn)證，進(jìn)行生化檢測或者基因診斷，確認(rèn)產(chǎn)前診斷結(jié)果的正確性。

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